本指南基于HJ 636-2012《水质 总氮的测定 碱性过硫酸钾消解紫外分光光度法》标准编写，提供更详细的操作过程。该标准适用于地表水、地下水、工业废水和生活污水中总氮的测定，使用碱性过硫酸钾消解紫外分光光度法。样品体积为10ml时，检出限为0.05mg/L，测定下限为0.20mg/L，上限为7.00mg/L（以N计）。操作前请确保遵守实验室安全规范，使用合格试剂和仪器，操作需在通风橱中进行，注意高温、化学品腐蚀和氨污染。
1. 方法原理
在碱性介质中，使用过硫酸钾将样品中的各种含氮化合物氧化转化为硝酸盐。在120–124°C条件下消解30min。随后，在紫外分光光度计上测定220nm（A220）和275nm（A275）处的吸光度，计算校正吸光度A=A220- 2A275。总氮含量（以N计）与校正吸光度A成正比。
 2. 干扰及消除
样品中碘化物含量≥总氮的2.2倍，或溴化物含量≥总氮的3.4倍时，会产生正干扰。
六价铬（Cr(VI)）和三价铁（Fe(III)）离子也会干扰，可通过加入1–2 ml的5%盐酸羟胺溶液（NH2OH·HCl）消除。
有机物可能干扰吸光度测定，使用双波长校正可部分消除。
若样品浑浊或有色，需过滤、离心或稀释处理。
3. 试剂和材料
所有试剂需符合国家标准，氮含量<0.0005%。实验用水为无氨水。试剂配制需使用无氨水，并在聚乙烯瓶或具塞玻璃瓶中储存。
无氨水：每升蒸馏水中加入0.10ml浓硫酸（ρ=1.84 g/ml），蒸馏收集馏出液于具塞玻璃容器中。或使用新鲜去离子水，确保无氨污染。
氢氧化钠（NaOH）：分析纯，固体。
过硫酸钾（K2S2O8）：分析纯，固体。
硝酸钾（KNO3）：基准或优级纯，烘干后使用。
浓盐酸（ρ=1.19 g/ml）：分析纯。
浓硫酸（ρ=1.84 g/ml）：分析纯。
盐酸溶液（1+9）：取10 ml浓盐酸，加水稀释至100 ml。
硫酸溶液（1+35）：取10 ml浓硫酸，缓慢加入350 ml水中，冷却后定容至360 ml。
氢氧化钠溶液（200g/L）：称取20.0gNaOH，溶解于100ml无氨水中。
氢氧化钠溶液（20g/L）：取上述200g/L溶液10ml，加水稀释至100ml。
碱性过硫酸钾溶液：称取40.0g K2S2O8，溶解于600ml无氨水中（可加热至50°C辅助溶解）。另称取15.0g NaOH，溶解于300ml无氨水中。冷却后混合两溶液，加水定容至1000ml。聚乙烯瓶储存，一周内有效。若溶液浑浊，需重新配制。
硝酸钾标准储备液（ρ(N)=100mg/L）：称取0.7218gKNO3（105°C烘干2 h），溶解于1000ml无氨水中，加1–2ml氯仿作为防腐剂，0–10°C避光储存，稳定6个月。
硝酸钾标准使用液（ρ(N)=10.0mg/L）：取10.00ml储备液，加水稀释至100ml，现用现配。
盐酸羟胺溶液（50g/L）（用于干扰消除）：称取5.0g NH2OH·HCl，溶解于100ml水中。
4. 仪器和设备
紫外分光光度计：带1cm（10mm）石英比色皿，波长范围至少覆盖220–275 nm。
高压蒸汽灭菌器或高压锅：可控制温度120–124°C，带有安全阀。
分析天平：感量0.0001g。
其他：具塞磨口玻璃比色管（25ml）、移液管（精度0.01ml）、容量瓶、纱布、线绳、试管架等。所有玻璃器具需专用，避免氨污染，先用稀酸洗涤，再用水冲洗。
5. 样品采集与保存
按照HJ 91.1、HJ91.2、HJ164相关规定采集样品；样品体积至少采集100 ml，将采集好的样品贮存在聚乙烯瓶或硬质玻璃瓶中，用浓硫酸调节pH值至1～2,常温下可保存7d。若样品浑浊，需静置且使用便携式离心机离心（2000 r/min，3min）处理。
 6. 分析程序
操作需由专业人员执行，全过程避免氨污染，使用专用器具。以下步骤包括校准曲线绘制、样品测定和空白试验。每个批次测定需同时进行空白和标准样。
6.1 校准曲线的绘制
（1）准备标准系列：分别移取0.00ml、0.20ml、0.50ml、1.00ml、3.00ml和7.00ml硝酸钾标准使用液（ρ(N)=10.0mg/L）于6个25 ml具塞磨口玻璃比色管中。对应的总氮含量（以N计）分别为0.00μg、2.00μg、5.00μg、10.0μg、30.0μg和70.0 μg。
（2）加水稀释：每个管中加无氨水稀释至10.00ml。
（3）加入试剂：每个管中加入5.00ml碱性过硫酸钾溶液，摇匀。若样品有干扰，加入1.0–2.0ml盐酸羟胺溶液（50g/L）。
（4）密封管子：塞紧管塞，用纱布和线绳扎紧管口，以防高压下弹出。
（5）消解：将比色管置于高压蒸汽灭菌器中。加热至顶压阀吹气，关闭阀门，继续加热至温度达120°C，开始计时。保持温度在120–124°C之间，消解30 min。消解过程中监控温度，避免超过124°C导致氮损失。
（6）冷却：消解结束后，自然冷却至室温，开阀放气。移去外盖，取出比色管。按住管塞，将管中液体颠倒混匀2–3次。若管口或管塞破裂，废弃并重新操作。
（7） 酸化：每个管中加入1.0ml盐酸溶液（1+9），摇匀。
（8）定容：加无氨水稀释至25ml标线，盖塞混匀，静置10min。
（9）测定吸光度：使用10mm石英比色皿，以无氨水作参比溶液。在紫外分光光度计上，分别测定波长220nm和275nm处的吸光度（A220和A275）。仪器预热30min，确保稳定。
（10）计算校正吸光度：
零浓度（空白）校正吸光度Ab = Ab220 - 2Ab275。
标准溶液校正吸光度As = As220 - 2As275。
差值Ar = As - Ab。
（11） 绘制曲线：以总氮含量（μg）为横坐标，Ar为纵坐标，绘制校准曲线。求得线性回归方程：Ar = k × m + b，其中m为总氮含量（μg），k为斜率，b为截距。相关系数r应≥0.999。
6.2 样品测定
（1） 取样：移取10.00ml样品（若浓度高，减少体积并加水至10.00 ml）于25ml具塞磨口玻璃比色管中。
（2）按照6.1的步骤3–10进行：加入试剂、密封、消解、冷却、酸化、定容、测定吸光度。
（3）计算校正吸光度A = A220 - 2A275。
6.3 空白试验
用10.00 ml无氨水代替样品，按照6.2步骤进行。全过程至少做3个平行空白，计算平均Ab。
7. 结果计算
总氮浓度ρ(TN, mg/L)计算公式：
ρ(TN) = (A - Ab) / k × (V / V0) / 1000  
其中：
A：样品校正吸光度。
Ab：空白校正吸光度。
 k：校准曲线斜率。
V：定容体积（ml，通常25ml）。
V0：样品体积（ml，通常10ml）。
当测定结果小于1.00mg/L时，保留到小数点后两位；大于等于1.00mg/L时，保留三位有效数字。若稀释，乘以稀释倍数。
 8. 质量保证和质量控制

校准曲线的相关系数r应大于等于0.999。

每批样品应至少做一个空白试验，空白试验的校正吸光度A应小于0.030。超过该值时应检查实验用水、试剂（主要是氢氧化钠和过硫酸钾）纯度、器皿和高压蒸汽灭菌器的污染状况。

精密度：每批样品应至少测定10%的平行双样，样品数量少于10时，应至少测定一个平行双样。当样品总氮含量≤1.00mg/L时，测定结果相对偏差应≤10%；当样品总氮含量>1.00mg/L时，测定结果相对偏差应5%。测定结果以平行双样的平均值报出。

每批样品应测定一个校准曲线中间点浓度的标准溶液，其测定结果与校准曲线该点浓度的相对误差应≤10%。否则，需重新绘制校准曲线。

准确度：每批样品应至少测定10%的加标样品，样品数量少于10时，应至少测定一个加标样品，加标回收率应在90%～110%之间。 

9. 注意事项
全过程避免氨污染：使用专用器具，操作在无氨环境中。
消解温度严格控制：120–124°C，时间30 min。过高或过低影响转化率。
若样品浓度超出范围（>7 mg/L），稀释重测。
仪器校准：每日检查紫外分光光度计零点和稳定性。
废弃物处理：按环保要求，中和后排放。

实验所用的器皿和高压蒸汽灭菌器等均应无氮污染。实验中所用的玻璃器血应用盐酸溶液或硫酸溶液浸泡，用自来水冲洗后再用无氨水冲洗数次，洗净后立即使用。高压蒸汽灭菌器应每周清洗。

在碱性过硫酸钾溶液配制过程中，温度过高会导致过硫酸钾分解失效，因此要控制水浴温度在60℃以下，而且应待氢氧化钠溶液温度冷却至室温后，再将其与过硫酸钾溶液混合、定容。

使用高压蒸汽灭菌器时，应定期检定压力表，并检查橡胶密封圈密封情况，避免因漏气而减压。

转自：环保守望者